高效液相色谱(HPLC)定量检测花椒麻味物资含量措施的建树（一）

2024-05-05 05:32:36 [休闲] 来源：跃然纸上网

花椒是高效指芸香科青椒以及红花椒等去除了种子以及杂质的干燥成熟果皮，次若是液相作为中药以及食物调味品。花椒在全天下250多种，色谱树主要扩散于亚洲、定量的建非洲、检测美洲及大洋洲的花椒含量热带及亚热带地域，亚洲是麻味花椒主产区，中国约有45种，物资13个变种。措施花椒在我国种植历史悠长，高效在我国的液相运用已经有两千余年的历史，它有确定的色谱树药效成份，有杀虫、定量的建止痒、检测抑菌、花椒含量抑制血小板凝聚、抗氧化等熏染。花椒中的主要化学成份有酰胺、生物碱、木脂素、挥发油等。

酰胺类物资是花椒的主要麻味成份，也是花椒主要的风韵物资。当初，从花椒中分说患上到的麻味物资总共25种，为一类链状不饱以及脂肪酰胺物资，其中山椒素是代表性的麻昧物资，具备强烈的宽慰性，结晶后为红色晶体。其化学性子极不晃动，在室温下部署多少分钟后赶快酿成黄色胶状，易溶于甲醇以及丙酮，热乙醇，难溶于氯仿，不溶于煤油醚，因此花椒酰胺类物资需在高温低氧的条件下密封保存。由于花椒麻味物资不易保存，用HPLC法对于花椒中麻味物资的检测多在麻味物资分说纯化历程中，并接管与麻味物资的妄想判断等相散漫方式，具备操作啰嗦等缺陷。当初，国内外尚未建树无关花椒麻味物资评估的尺度措施，2015年版《中华国夷易近共以及国药典》对于花椒的品质操作并无周全反映花椒活性成份，也未有可用于麻味检测的参比样品。因此，运用HPLC法检测花椒麻味物资含量就必需要制备尺度品，这就加大了检测其含量的难度，从而限度了花椒的品质操作及尺度系统等方面的运用。本文以试验室重价的花椒麻味物资为尺度样品，建树了HPLC定量检测花椒麻味物资含量措施。期望为食物工业中花椒质料的筛选提供确定的实际凭证，也为花椒产物的进一步开拓以及钻研奠基根基。

一、质料以及措施

一、试验质料

整粒花椒样品干燥破碎捣毁，过60目筛(孔径＜O.03妹妹)，备用，采自天下的花椒破费基地，如四川、陕西、云南等地；甲醇：合成纯，成都科龙试剂厂；甲醇：色谱纯，天津四友试剂公司。

二、主要配置装备部署

合成型高效液相色谱仪：LC-10AT型，配有紫外可见光检测器，日本岛津公司；色谱柱：HC-C18型，安捷伦公司；电子天平：FA2004型，感量O.0001，上海详尽电子仪器有限公司；电热恒温鼓风干燥箱：DHG-9030型，上海-恒迷信仪器有限公司。

三、措施

（1）花椒麻味物资的提取

将花椒麻味物资的提取可接管有机溶剂浸提法。操作措施是：称取确定量破碎捣毁混匀后的花椒粉末，退出20倍的合成纯甲醇于40℃～50℃水浴振荡浸提后，离心过滤，取其上清液定容患上待测样品液。

（2）色谱条件

检测条件：岛津LC-10AT型合成型高效液相色谱仪，HC-C18型色谱柱，以1.0mL／min15min50％甲醇以及水溶液梯度洗脱，10min70％甲醇以及水溶液洗脱，柱温为35℃，紫外检测波长254nm。

（3）检测措施

高效液相色谱(HPLC)的检测措施：外标法。以试验室重价的花椒麻味物资尺度品为尺度样品，经甲醇溶液消融并定容后配成一系列差距梯度的标样溶液。分说罗致确定量的标样注入色谱柱中，测卓越谱图中各目的物的峰面积，而后以HPLC的峰面积作为纵坐标，以对于应的花椒麻味物资含量作为横坐标作图，作尺度曲线。而后罗致划一量经预处置的待测样品液，与相同条件下检测，从色谱图上测出花椒麻味物资的峰面积，在尺度曲线上查出所对于应的待测样品中花椒麻味物资的含量。

（4）尺度曲线的绘制

精确量取尺度品(55μg／mL)，接管甲醇配制成一系列品质浓度的花椒麻味物资尺度溶液(μg／mL)：O、十、20、30、40、45。而后分说抽取20μg溶液妨碍HPLC检测。以保存光阴为22～24min的峰为目的峰，以其HPLC峰面积为纵坐标，对于应标品浓度为横坐标，作尺度曲线。

（5）措施学验证

分说对于试验妨碍精确度、详尽度、一再性以及加标接管率的合成测定。

二、服从

一、最佳色谱合成条件的判断

经由大批的豫备试验，合成钻研了柱温对于分说下场的影响。在柱温为室温25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、45℃等温度妨碍试验，发现柱温为35℃时，实际塔板数最高，洗脱峰光阴距离最大。钻研中还发现，花椒麻味物资含量在0～300μg／mL规模内，花椒麻味物资的含量以及照应峰的面积具备较高的线性相关度。

（1）洗脱剂最佳流速的判断

为了探究最佳的分说条件，在紫外检测波长254nm，柱温35℃，用15min的50％～70％甲醇以及水溶液梯度洗脱以及10min70％甲醇以及水溶液洗脱，流速在0.8～1.2mL/min妨碍检测，分说下场以及峰形都不同(图l，2，3)。在1.2mL／min时出峰光阴最快，功能最高，但思考到1.2mL／min时色谱柱柱压过高，会严正影响色谱柱的运用年限，综合思考流速1.OmL/min为最佳下场。

（2）洗脱剂最佳梯度的判断

当紫外检测波长为254nm，柱温为35℃，流速为1.0mL／min时，接管10min的50％甲醇以及水溶液梯度洗脱，15min70％甲醇以及水溶液洗脱；70％甲醇等度洗脱，接管15min的50％甲醇以及水溶液梯度洗脱，10min70％甲醇以及水溶液洗脱；以及其余梯度洗脱妨碍试验，服从表明检测条件为15min的50％甲醇以及水溶液梯度洗脱，10min70％甲醇以及水溶液时，洗脱的分说下场以及峰形最佳。

因此，本试验中所判断的HPLC检测条件为：岛津LC-10AT型合成型高效液相色谱仪，色谱柱为HC-C18柱(4.6妹妹×250妹妹)，15min的50％甲醇以及水溶液梯度妨碍洗脱，10min70％甲醇以及水溶液洗脱，流速为1.0mL/min，柱温35℃，紫外检测波长为254nm。